Factoren die een door enzymen veroorzaakte chemische reactie beïnvloeden, zouden absoluut een ligatiereactie beïnvloeden, bijvoorbeeld de concentratie van het enzym en de reactanten, naast de reactietemperatuur en de duur van de incubatie. Ligatie wordt gecompliceerd door het feit dat de gewenste ligatieproducten voor de meeste ligatiereacties tussen twee verschillende DNA -moleculen zouden moeten zijn en dat de reactie zowel inter- als intramoleculaire reacties omvat, en dat een extra annealingstap nodig is voor efficiënte ligatie.
De drie stappen voor het vormen van een nieuwe fosfodiësterbinding tijdens ligatie zijn: enzym-adenylylering, adenylyloverdracht naar DNA en inkepingen. Mg (2+) is een cofactor voor katalyse, overtuigend bij hoge concentraties Mg (2+) is de efficiëntie van de ligatie hoog. Als de concentratie van Mg (2+) beperkt is, is de nick-seal de snelheidsbeperkende reactie van de actie, en blijft adenylyle DNA tussenproduct in de oplossing. Een dergelijke adenylylering van het enzym verhindert het opnieuw binden aan de adenylyleerde DNA tussentijdse vergelijking van een achilleshiel van LIG1, en vormt een risico als ze niet gefixeerd zijn.
Afbeelding 092A | 9. Bereiding van kodecytes / kodevirions. Meng eenvoudig cellen / virionen met een FSL-oplossing (met 1 of meer FSL's) en incubeer gedurende 10–120 minuten bij 37 ° C (of bij temperaturen zo laag als 4 ° C). De constructies zullen spontaan in het membraan worden opgenomen en bovendien zijn er geen stappen vereist. | Xiphiaz / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Preparation_of_kodecytes_and_kodevirions.svg) from Wikimedia Commons
Auteur : John Kaisermann
Reacties
Een reactie posten