In dit voorbeeld zal een gen uit een zoogdiergenenbibliotheek worden gesubkloneerd in een bacterieel plasmide (bestemmingsplatform). Het bacteriële plasmide is een stuk circulair DNA dat regulerende elementen bevat waardoor de bacteriën een genproduct (genexpressie) kunnen produceren als het op de juiste plaats in het plasmide wordt geplaatst. De productielocatie wordt geflankeerd door twee locaties voor het snijden van beperkende enzymen "A" en "B" met incompatibele plakkerige uiteinden.
De zoogdier DNA komt niet met deze beperkingssites, dus ze zijn ingebouwd door middel van overlappende extensie PCR. De primers zijn ontworpen om de beperkingsplaatsen zorgvuldig te plaatsen, zodat de codering van het eiwit in-frame is en een minimum aan extra aminozuren aan weerszijden van het eiwit wordt geïmplanteerd.
Zowel het PCR -product dat het zoogdiergen bevat met de nieuwe beperkingsplaatsen en het bestemmingsplasmide worden onderworpen aan limitatieve vertering, en de verteringsproducten worden gezuiverd door gel electrophoresis .
Afbeelding 274A | Deze afbeelding geeft een diagram van het verloop van subcloning zoals links is weergegeven. | De oorspronkelijke uploader was Takometer op Engelse Wikipedia. / Attribution 2.5 Generic | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Subcloning.png) from Wikimedia Commons
Auteur : Yavor Mendel
Reacties
Een reactie posten