Restrictie-enzymen kunnen een grote verscheidenheid aan uiteinden genereren in de DNA die ze verteren, maar in kloneringsexperimenten genereren de meest gebruikte beperkende enzymen een enkelstrengs overhang van 4 basen, het kleverige of cohesieve uiteinde genaamd (uitzonderingen zijn onder meer NdeI dat genereert een overhang met twee basen, en degenen die stompe uiteinden genereren). Deze kleverige uiteinden kunnen versmelten met andere compatibele uiteinden en worden geligeerd in een ligatie met een kleverig uiteinde (of cohesief uiteinde). EcoRI bijvoorbeeld genereert een AATT opgeheven, en A en T een lagere smelttemperatuur dan C en G, de smelttemperatuur T m is laag bij ongeveer 6 °C voor de meeste enzymen beperking, de overhangen geproduceerd een T mdat is ongeveer 15 °C. Voor praktische doeleinden worden plakkerige eindligaties uitgevoerd bij 12-16 °C, of bij kamertemperatuur, of alternatief bij 4 °C voor een langere periode.
Afbeelding 092A | 9. Bereiding van kodecytes / kodevirions. Meng eenvoudig cellen / virionen met een FSL-oplossing (met 1 of meer FSL's) en incubeer gedurende 10–120 minuten bij 37 ° C (of bij temperaturen zo laag als 4 ° C). De constructies zullen spontaan in het membraan worden opgenomen en bovendien zijn er geen stappen vereist. | Xiphiaz / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Preparation_of_kodecytes_and_kodevirions.svg) from Wikimedia Commons
Auteur : John Kaisermann
Reacties
Een reactie posten